技術原理

CRISPR/Cas系統是細菌免疫系統的一部分，經過人工的優化CRISPR/Cas9系統，操作簡單，可以針對更廣泛的物種進行基因編輯。其介導基因編輯的原理是CRISPR/Cas9系統中的gRNA引導Cas9蛋白，識別靶基因進行雙鏈切割靶標序列；基因組DNA被切割后，造成雙鏈斷裂(DSB)，利用細胞會進行修復切割位置，而修復方式有兩種，一種是同源重組修復(HDR)；另一種是非同源末端連接(NHEJ)；借助NHEJ的修復機制,在修復過程中會在基因組DNA隨機引入插入、缺失和替換事件，從而引入突變。

技術優勢

基因編輯技術是功能基因研究中的一把“利器”，使獲得理想的編輯材料系變得簡單、快速，不僅方便了基因功能研究也推動了整個生物行業的進步。艾迪晶生物基因編輯技術可編輯基因上游調控區域，以及結構基因的外顯子，內含子等，也可以用于非編碼RNA(如LncRNA,microRNA等)的編輯。

載體支持4種植物真核抗性基因：

（1）抗潮霉素(HPT)；

（2）抗除草劑(Bar，Glyphosate)；

（3）抗卡那霉素(NPTII)；

（4）抗壯觀霉素（Spec)。

實驗結果

本系統可以實現多基因打靶，在同一載體上組裝多個靶點(最高可達20個靶點)，從而實現“一敲多”、“多敲一”以及“多敲多”的設計；

本系統利用多種不同的植物sgRNA啟動子驅動SgRNA表達，避免在農桿菌或者植物細胞內sgRNA表達盒之間發生重組而影響敲除效率；

基于Golden Gate和Gibson克隆技術，簡單、高效的實現SERNA表達盒的組裝；

通過優化Cas9密碼子，極大的提高了CRISPR/Cas9的編輯效率，在水稻中的平均打靶效率高達90%以上。